一、指标介绍:
TH位于线粒体的内膜上,又称为呼吸电子传递链复合体六,催化NADH+NADP+和 NAD++NADPH相互转化。催化正向反应称为TH-1。线粒体NADH含量增加时会导致线粒体膜的H+电化学梯度升高,因而促进了电子传递链上ROS的产生。TH-1促进NADH转换为NADPH,从而提高线粒体的抗氧化能力。
NADH和NADPH均在340nm有特征吸收,因此TH催化的转氢反应不能导致340nm吸光度发生变化。用人工合成底物3-乙酰吡啶腺嘌呤二核苷酸磷酸(APADP+)替代NADP+,TH-1催化 APADP+还原生成的APADPH在375nm有特征光吸收,因此通过测定375nm光吸收增加速率,来计算TH-1活性。
二、实验器材:
研钵(匀浆机)、冰盒(制冰机)、台式离心机、可调式移液枪、水浴锅(烘箱、培养箱、金属浴)、离心管、蒸馏水(去离子水、超纯水均可)、96孔板、酶标仪。