Fluo-3 是一种将 Fluo-3 结构中的 Cl 替换成 F 的钙荧光探针。由于将 Cl 替换成了电子吸引力更强的 F，它的最大激发波长会向短波长处偏离 10 nm 左右。这个波长更接近于氩激光器的波长，所以用氩激光器激发时，Fluo- 3 的荧光强度比 Fluo-3 强一倍。由于 Fluo 4 与钙离子的亲和力和 Fluo 3 近似(Fluo 3:Kd=0.4 μmol／l、Fluo 4:Kd=0.36 μmol／l)，所以使用上和 Fluo 3 完全相同，可以使用激光共聚焦显微镜或流式细胞仪等仪器检测细胞内钙离子浓度的变化。Fluo 4-AM 是 Fluo 4 的一种乙酰甲酯衍生物，通过培养，能够轻易进入细胞中。Fluo-3, AM穿透细胞膜进入细胞后被细胞内的酯酶剪切形成 Fluo-3，从而被滞留在细胞内，Fluo-3 若以游离配体形式存在时几乎是非荧光性的，但是当它与细胞内钙离子结合后可以产生较强的荧光，最大激发波长为 494nm，最大发射波长为 516nm。可以使用激光共聚焦显微镜或流式细胞仪检测细胞内钙离子浓度的变化。
Fluo-3 钙离子检测试剂盒(Fluo-3 Calcium Assay Kit)是一种基于 Fluo-3 AM 钙离子荧光探针检测细胞内钙离子浓度的试剂盒。本试剂盒可以使用荧光显微镜进行荧光成像检测，也可以使用荧光酶标仪或流式细胞仪进行荧光的定量检测。使用荧光显微镜或荧光酶标仪还可以进行细胞内钙离子浓度的动态变化检测。钙(Calcium)通常是哺乳动物机体内最为丰富的矿物质，参与调控众多的细胞生命活动过程，也是最为重要的细胞内调控因子之一。钙能够以自由离子或结合钙离子的复合物两种形式存在，例如磷酸钙和碳酸钙复合物即为骨骼组织的组成成分。包括肌肉收缩、细胞粘附、激素/神经递质释放、糖原代谢、细胞增殖/分化、血凝、神经或突触传递以及骨骼结构支持在内的大量生理过程都受到钙离子信号的调控。细胞特异性钙信号系统完整性的缺陷会导致一些疾病的发生。
本试剂盒检测细胞内钙离子流通量的原理是：钙离子荧光探针 Fluo-3 AM 本身几乎无荧光，一旦进入细胞内经过胞内酯酶水解后产生的 Fluo-3 和钙离子结合后可以发出绿色荧光。细胞外的钙离子内流，或者细胞内储存的钙离子释放，使得细胞浆内的钙离子浓度增加，细胞内的 Fluo-3 可以结合更多的钙离子，最终引起细胞内绿色荧光强度增加；细胞内的钙离子外流或储存，使得细胞浆内的钙离子浓度降低，细胞浆内的 Fluo-3 可以结合的钙离子减少，最终引起细胞内绿色荧光强度下降。钙离子荧光探针 Fluo-3 AM 可广泛地用于钙离子浓度的动态变化检测，以及高通量筛选影响钙离子浓度变化的 G 蛋白偶联受体激动剂或抑制剂等。
本试剂盒使用便捷，提供了多种配套试剂，并且染色后无需洗涤。本试剂盒提供了用于稀释 Fluo-3 AM 的检测缓冲液(Assay Buffer)，该检测缓冲液可以极大程度地保证细胞活力和接近正常的生长状态；提供了可增强Fluo-3 AM 溶解性的促溶剂(Solubility Enhancer)可以改善染色效果；提供的染色增强剂(Staining Enhancer)在
检测中可有效地维持细胞内荧光并减少背景荧光。同时，本试剂盒染色后可不用洗涤，使用更方便。
对于 96 孔板中的样品，按照每孔使用 100uL Fluo-3 染色液计算，本试剂盒的小包装和中包装分别可以进行200 次和 1000 次检测；如果用于流式细胞仪检测，按照每个样品的检测体系体积为 0.5ml 时，本试剂盒的小包装和中包装分别可以进行 40 次和 200 次检测；对于 6 孔板中的贴壁培养细胞样品，按照每孔使用 1ml Fluo-3 染色
液计算，本试剂盒的小包装和中包装分别可以进行 20 次和 100 次检测。
